Deux « honnêtes hommes » sont à l’origine de la bibliothèque : Esprit Calvet et Esprit Requien.

Ils sont complémentaires mais différents par leur origine et leur cursus, le premier professeur à la faculté de médecine d’Avignon, le second, autodidacte attiré par l’histoire naturelle, la botanique en particulier, deviendra par la suite une référence dans ce domaine.

Le 18 janvier 1840, Esprit Requien (1788-1852) fait don à ses concitoyens de ses collections scientifiques et de sa bibliothèque d’Histoire naturelle. Il écrit : « La pensée de ma vie entière a été de doter ma ville natale d’un musée d’histoire naturelle digne d’elle ; j’y suis parvenu, je crois ; et il a fallu, pour ce faire, toute mon activité, tout mon temps et le sacrifice de la majeure partie de mon patrimoine ».
Pendant la deuxième guerre mondiale, dès novembre 1942, conformément aux directives gouvernementales, des caisses de livres jugés rares et précieux, sont mises en sécurité au château de Murs et au château de Javon, commune de Lioux (Vaucluse) appartenant à Monsieur Vayson de Pradenne.

Depuis 1943, cette bibliothèque est installée dans l’ancien hôtel particulier de la famille De Raphaëlis de Soissans, jouxtant le musée Calvet et aujourd’hui dénommé Museum Requien en son honneur.

En 1976, sous l’impulsion de Jean-Claude Ledoux, conservateur à l’avant garde du progrès et respectueux du patrimoine, la riche collection de livres est mise à l’abri de la poussière dans des rayonnages métalliques et électriques..